超微量分光光度計是實驗室里常見儀器,常被用于檢測核酸的濃度和純度,那么它在蛋白質(zhì)檢測上的應(yīng)用呢?
常用的蛋白質(zhì)吸收波長為280nm,其他常見的顯色法蛋白質(zhì)檢測所需要的波長為562nm、595nm、650nm等。Microdrop系列超微量分光光度計的檢測波長范圍覆蓋185-910nm,可以覆蓋大部分實驗所需情況,并且內(nèi)置了直接檢測、BCA法、Bradford法、Lowry法等共6種可選計算方法,其基座模式能夠檢測0.5-2μL的樣本,大大節(jié)約了樣本的消耗。
但是在實際使用中,不時會有一些小伙伴發(fā)現(xiàn),檢測出來的結(jié)果不準確、不穩(wěn)定,這是為什么呢?
很大的一個原因是——樣本量。雖然基座檢測時樣本的量不是特別關(guān)鍵,但是必須保證兩根光纖之間形成完整的液柱,這樣才能保證兩根光纖之間形成樣本液柱,使得我們的光信號能夠完整通過樣本并回流到檢測器中。
要使樣本液滴能夠順利地被拉出液柱,需要保證液滴具有足夠大的表面張力,決定液滴表面張力的主要因素是溶液中水分子的氫鍵結(jié)合力。通常情況下,溶液中所有的溶質(zhì)(蛋白,DNA,RNA,鹽離子,去垢劑分子等)都會對表面張力產(chǎn)生影響,總的來說純化獲得的蛋白質(zhì)溶液通常表面張力會較低。
因此,我們建議,在進行純蛋白、Bradford,BCA,Lowry或者蛋白Pierce 660nm試驗時,適當(dāng)增加上樣量至2μL,能夠有效幫助液柱形成,提高最終檢測結(jié)果的準確和精確性。